中华蜜蜂囊状幼虫病防治技术规范

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摘要:1范围本规范规定了中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断、疫情处理、预防、控制和治疗等技术措施。本标准适用于辽宁省中华蜜蜂的饲养。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注

1 范围

本规范规定了中华蜜蜂囊状幼虫病的诊断、疫情处理、预防、控制和治疗等技术措施 。

本标准适用于辽宁省中华蜜蜂的饲养 。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的  。凡是注日期的引用文件 ,仅注日期的版本适用于本文件 。凡是不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修定单)适用于本文件  。

GB3095环境空气质量标准

NY5027无公害食品 畜禽饮用水水质

NY 5139—2002无公害食品 蜜蜂饲养管理准则

NY5138 无公害食品 蜜蜂饲养兽药使用准则

DB21/T 1645-2008蜜蜂防疫技术规范

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本规范  。

3.1 中蜂囊状幼虫病

中华蜜蜂囊状幼虫病是由囊状幼虫病毒引起的中华蜜蜂接触性传染性烈性病  。

3.2 蜂群

以群体为单位 ,由蜂王、工蜂、雄蜂组成的能独立生活的蜜蜂群体  。

3.3 子脾

巢房内以蜜蜂卵、幼虫、封盖蛹为主的巢脾  。

4 诊断

依据本病流行病学特点、临床症状、病理变化、实验室检验等可做出判断  。

4.1流行特点

早春或晚秋气温不稳定时易感染本病  ,成蜂和幼虫均可感染  ,但成蜂不表现症状 ,幼虫出现座糜烂、死亡  ,而被蜜蜂清除巢外  。蜂群因长期断子 ,最终导致蜂群飞逃或因无蜂而消亡  。

本病的传播途径是蜂群间主要与病蜂的接触传染  ,同一蜂群内  ,成蜂通过饲喂幼虫  ,将病毒传染给健康幼虫  ,导致幼虫患病  。

4.2 临床症状

囊状幼虫病主要感染2~3日龄幼虫  ,潜伏期5~6天  ,于封盖后死亡  。

4.2.1箱外观察 每天早上 ,蜜蜂开始活动时  ,箱前有蜜蜂从巢内拖出的病虫尸体  ,可疑为蜂群患囊状幼虫病 。

4.2.2开箱检查 打开蜂箱 ,提出子脾 ,子脾不整齐 ,封盖子、未封盖子、空巢房、卵房混杂  ,房盖有穿孔 ,房内有死亡幼虫  ,白色无味  ,可初步确认  。

4.3实验室诊断

4.3.1电镱检查 取病死幼虫  ,加等量0.03M磷酸缓冲液和1/4体积四氯化碳  ,研磨、匀浆  。经超速离心机差速和蔗糖蜜度梯度离心提取 ,纯化  。用提取物制备电镜片  ,置电镜下观察  ,有许多圆形病毒颗粒  ,接近球状的六边形 ,直径约为30 nm  ,可确诊为囊状幼虫病  。

4.3.2血清诊断 应用免疫高琼脂双扩散反应和对流免疫电泳法  ,进行抗原、抗体反应制备标准囊状幼虫病抗体血清和待检测病蜂悬浮液  ,

取病虫组织液  ,经4000 rpm离心15min  ,取上清液为检测样品(抗原) ,若采用琼脂免疫扩散或对流免疫电泳关检测  ,若出现沉淀线  ,即为阳性  ,感病;无沉淀线产生即为阴性  ,健康  。

4.3.3 聚合酶链式反应扩增(RT-PCR)

4.3.3.1 Trizol试剂法

通过采集带有明显囊状幼虫病症状的幼虫 ,将其病样溶于RNA提取试剂TRIzol中  。

4.3.3.1.1细胞或组织加Trizol后  ,室温放置5min ,使其充分裂解 。注:此时可放入-70℃长期保持  。

4.3.3.1.2 12000rpm 离心5min  ,弃沉淀  。

4.3.3.1.3 按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿 ,振荡混匀后室温放置15min  。注:禁用漩涡振荡器  ,以免基因组DNA断裂  。

4.3.3.1.4 4℃12,000g离心15min  。

4.3.3.1.5 吸取上层水相  ,至另一离心管中  。注:千万不要吸取中间界面  。

4.3.3.1.6 按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀  ,室温放置5-10min  。

4.3.3.1.7 4℃  ,12,000g离心10min  ,弃上清  ,RNA沉于管底  。

4.3.3.1.8 按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇  ,温和振荡离心管 ,悬浮沉淀 。

4.科比宣布退役日期3.3.1.9 4℃ 8,000g离心5min ,尽量弃上清 。

4.3.3.1.10室温晾干或真空干燥5-10min或55-60℃,5-10min  。注:RNA样品不要过于干燥  ,否则很难溶解  。

4.3.3.1.11用50ul 无菌水  ,TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品 ,贮存于-20℃备用 。

4.3.3.2 RT-PCR

根据反转录试剂盒的步骤  ,得到第一链cDNA  。根据第一链及设计的相应引物  ,进行PCR扩增  ,其反应条件如下:首先94℃变性3min;接着PCR进行30个循环  ,循环条件为94℃/30s ,45℃/40s  ,72 ℃/40s;最后72 ℃延长10min  。扩增产物用1.0% 琼脂糖凝胶电泳检查  ,当电泳产物出现与目标大小一致的条带 ,且唯一一条 ,而阴性样品无条带  ,则证实已检测到目标病毒  。

5 疫情处理

根据流行病学特点、临床症状  ,结合实验室检测做出的诊断结果可作为疫情处理的依据  。

5.1 发现疑似中蜂囊状幼虫病疫情时  ,养殖户应立即将病蜂(场)隔离  ,并禁止其移动 。当地动物防疫监督机构要及时派员到现场进行调查核实  ,包括流行病学调查、临床症状检查、采集病料、实验室诊断等 ,根据诊断结果采取相应措施 。

5.1.1隔离条件

发现有蜂群感染中蜂囊状幼虫病  ,应立即将病群隔离  。同时对所有蜂群进行检查 ,根据检查结果分别处理 。

5.1.2病群 将确诊患中蜂囊状幼虫病的蜂群转移到5公里以外  ,不易扩散病原体 ,便于消毒处理的地方隔离治疗  ,病群的蜂机具、蜂产品等未经处理不得带回健康蜂场  。

5.1.3疑似患病群

将疑似病群另外安置一远离健康群的场所  ,蜂王剪翅  ,隔离观察  。

5.1.3假定健康群

将假定健康群于原地或另搬一场所进行观察 。

5.1.4隔离解除

隔离的病群治愈后  ,经一个月的观察期再无复发  ,即可解除隔离  。

5.2消毒

5.2.1消毒要求

病群、疑似病群和假定健康群都要进行消毒处理  。消毒内容包括蜂机具、蜂脾、蜂体和工作服  。

按NY 5139—2002无公害食品 蜜蜂饲养管理准则有关规定进行 。

5.3 扑杀  ,当蜂群发病严重  ,难以维持生存时 ,养殖者应将蜂销毁  ,以防其传染  。

5.4 无害化处理

对所有病死蜂采取焚烧后掩埋;对于被病蜂污染的蜂箱、巢脾等蜂机具可采用消毒方法进行处理 。

6囊状幼虫病的预防

6.1 蜂场环境

6.1.1 蜂场地势高燥、能满足蜂群摆放、背风向阳、安静、小气候良好 。

6.1.2 蜂场周围空气质量符合GB3095空气质量功能区二类区要求  。

6.1.3 水源充足  ,水质符合NY5027中幼畜禽的饮用水标准  。

6.1.4 隔离条件 平原地区至少在半径 5 公里以内  ,山区至少在3公里以内无西方蜜蜂饲养场  。

6.2 蜂场卫生要求

6.2.1 保持蜂场清洁  ,每周清理 1 次蜂场死蜂和杂草  ,清理的死蜂及时深埋;蜂场周围环境至少每季用5%的漂白粉乳剂喷洒或生石灰消毒一 次  。

6.2.2 蜂箱、隔王板每年至少消毒 1 次  。巢脾、饲喂器、脱粉器、起刮刀、割蜜刀、蜂刷等工具在使用前、后要洗刷干净并消毒  。工作服每周清洗消毒 1 次 。

6.2.3 所选用的消毒剂必须对人、蜂安全  ,无残留毒性  ,对蜂机具无破坏性  。

6.3蜂群管理

6.3.1 饲喂蜂群的蜂蜜、糖浆、花粉或花粉代用品要保证品质并经消毒灭菌处理  。不用被蜜蜂病原体污染的饲料喂蜂  。

6.3.2 不从疫区引进蜂种或到疫区放蜂 。

6.3.3 在早春和晚秋繁殖期  ,加强蜂群保温  ,保持蜂脾相称或蜂多于脾 。

6.4 药物预防

6.4.1 在整个繁殖和生产期 ,每个月用金银花等抗病毒类中草药预防一次 。

6.4.2 在春、夏、秋三个季节 ,每个季度用囊状幼虫病卵黄抗体预防一次  。

6.5 引种检疫

国内异地引入中蜂群或蜂王  ,应取得原产地动物防疫监督机构的检疫合格证明  。到达引入地后 ,种蜂必须隔离饲养一月以上  ,并由引入地动物防疫监督机构进行检测 ,合格后方可混群饲养  。

7囊状幼虫病的治疗

使用抗中蜂囊状幼虫病卵黄抗体  ,按2毫升/框蜂计算  ,两天喂一次  ,病愈为止  。

   
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